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組織培養(yǎng)已成為當(dāng)前農(nóng)林種苗生產(chǎn)中的一種重要的繁殖手段,與常規(guī)的無(wú)性繁殖方法相比,它具有繁殖速度快、周年生產(chǎn)、產(chǎn)品一致性好等優(yōu)點(diǎn),尤其在繁殖一些種源稀缺的品種時(shí),更能體現(xiàn)它的優(yōu)勢(shì)。紅葉石楠是近年從國(guó)外引進(jìn)的一個(gè)國(guó)際新品種,組織培養(yǎng)可以分以下幾個(gè)步驟進(jìn)行:外植體的取得→初代培養(yǎng)(無(wú)菌系的建立)→繼代培養(yǎng)(增殖培養(yǎng))→生根培養(yǎng)→煉苗及過(guò)渡移栽→移植到大田。 外植體的取得 選擇紅葉石楠的莖尖和莖段作為組培用的外植體。在取得紅葉石楠母株后,先置于溫室內(nèi)培養(yǎng)2周左右,期間注意不灑葉面水,每隔3-5天噴施一次殺菌劑,可有效降低初代培養(yǎng)時(shí)的污染率。在實(shí)際操作中,選取嫩枝先端未木質(zhì)化和半木質(zhì)化部分,剪成長(zhǎng)10cm左右的單芽,莖段部分去葉留2mm左右葉柄,莖尖部分可保留半張小葉,以飽和洗衣粉溶液浸泡3分鐘,用清水沖洗后備用。 初代培養(yǎng) 清洗后的外植體在接種前需進(jìn)行消毒處理,在超凈工作臺(tái)上用75%酒精浸泡10秒鐘,再轉(zhuǎn)入0.15%升汞溶液中滅菌8分鐘,倒去滅菌液,用事先準(zhǔn)備好的無(wú)菌水沖洗4-5次,瀝干水后,即可將帶腋芽的莖段或莖尖以生態(tài)學(xué)下端朝下,垂直接種到初代培養(yǎng)基上,以每瓶培養(yǎng)基接種一個(gè)外植體為宜。經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn),初代培養(yǎng)基以1/2MS+蔗糖30g+瓊脂7g+2.0BA+0.2IBA為最佳,pH值5.5-5.8,培養(yǎng)室溫度控制在25℃-30℃之間,光照12小時(shí)。接種后一周左右腋芽開(kāi)始萌動(dòng),30-40天可伸長(zhǎng)到2cm左右,即可切下進(jìn)入下一階段的繼代(增殖)培養(yǎng)。 繼代培養(yǎng)(增殖培養(yǎng)) 一般第一次繼代時(shí)增殖率較低,經(jīng)2-3次繼代后增殖數(shù)可達(dá)5倍左右。繼代培養(yǎng)基可用MS+1.0BA+0.1IBA,pH值5.5-5.8之間,每日光照12小時(shí)。無(wú)根的試管苗經(jīng)30-40天培養(yǎng)達(dá)到3cm左右時(shí),即可切割以擴(kuò)大繁殖。當(dāng)繼代苗達(dá)到一定數(shù)量后,可以進(jìn)行生根培養(yǎng)。 生根培養(yǎng) 當(dāng)紅葉石楠無(wú)根苗長(zhǎng)到高2cm左右時(shí),可轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基可用1/2MS+0.2-0.3NAA,一般經(jīng)一周左右可見(jiàn)紅色根生成,30-40天后根長(zhǎng)1-3cm,即可進(jìn)行煉苗反馴化,準(zhǔn)備移栽。 煉苗及過(guò)渡移栽 紅葉石楠組培苗移栽可省略瓶?jī)?nèi)煉苗過(guò)程,如能在溫室中擰松瓶蓋放置3-5天煉苗則更好,但要注意溫度應(yīng)控制在20℃-30℃之間。過(guò)渡移栽是整個(gè)組培過(guò)程中最為關(guān)鍵的一步,如失敗,則前功盡棄。因此移栽前要準(zhǔn)備充分,如能在早春和秋冬季移栽在溫床上效果最佳。在實(shí)際操作中,應(yīng)根據(jù)不同地區(qū)的氣候特點(diǎn)而有所區(qū)別。在江浙一帶,過(guò)渡苗床可建在普通單體塑料大棚內(nèi),床寬1.2m左右,床四周用磚砌高30cm,床底整平,有條件的可加鋪地?zé)峒訙鼐,上鋪15-25cm的移栽基質(zhì),基質(zhì)以蛭石∶珍珠巖∶泥炭=1∶1∶1為好。 組培苗是在無(wú)菌條件下繁育的,在移栽過(guò)程中對(duì)外界環(huán)境需要一個(gè)漸進(jìn)的適應(yīng)過(guò)程,因此需要對(duì)過(guò)渡苗床進(jìn)行較為嚴(yán)格的消毒處理。實(shí)踐中我們使用1000倍敵 克松溶液澆透整個(gè)苗床基質(zhì),再用0.15%高錳酸鉀溶液噴灑苗床表面及四周,24小時(shí)后即可移栽小苗。也可用800倍福爾馬林噴灑苗床表面,用塑料薄膜密封24小時(shí) 以上,再通風(fēng)12小時(shí),即可使用。 幼苗從瓶?jī)?nèi)取出后,用清水將根部的瓊脂等洗凈,同時(shí)應(yīng)注意盡量減少根部損傷。種入苗床后,澆灌時(shí)盡可能選擇清潔的水源,移栽當(dāng)天噴施1/4-1/2MS營(yíng)養(yǎng)液,并噴施800-1000倍甲基托布津或1000倍多菌靈藥液,以后每隔一周噴施一次,需連續(xù)噴施3-4次,移栽初期需特別注意保持苗床和空氣濕度,一般需全封閉管理一周左右,再半封閉一周左右,根據(jù)天氣情況在25天左右可逐步通風(fēng),除去覆蓋物。在春秋季節(jié)移栽時(shí),需遮蔭三周左右,冬季遮蔭二周左右即可。同時(shí)應(yīng)注意控制苗床溫度在15℃-30℃之間才利于成活,如環(huán)境溫度超過(guò)35℃,則不宜移栽。一般過(guò)渡移栽50天后,小苗就可上盆移栽,春季就可移入大田。 大田移栽 大田移栽的時(shí)機(jī)應(yīng)根據(jù)小苗生長(zhǎng)情況和天氣情況確定。一般小苗長(zhǎng)至5cm以上移栽就可以保證95%以上成活率,如在10cm以上移栽則效果更好。大田移栽后期管理與其他方法繁殖的小苗一樣操作即可。(記者 李玉祥)
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